iFluorTM 633标记鬼笔环肽（远红）

产品描述

鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素，以高亲和力(Kd=20nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å,分子量<2000 Daltons，未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

产品信息

表1.组成信息

产品优势

本品为iFluorTM633标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM633鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot®纳米晶体和其他iFluorTM偶联物(包含iFluorTM偶联二抗)。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。

使用说明

需要自备材料

①1×PBS缓冲液,pH 7.4,细胞培养级别

②固定液4%多聚甲醛(不含甲醇)(溶于PBS缓冲液)

③透化液Triton X-100(溶于PBS缓冲液)

④BSA，标准级别

⑤DAPI染液(即用型)

1×工作液准备

吸取1µL iFluorTM633标记鬼笔环肽(溶于DMSO)到1mL含有1% BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注：①使用前需将DMSO iFluorTM633鬼笔环肽储存液分装并于-20℃避光干燥保存。

②不同的细胞染色情况不同，相应iFluorTM633鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

染色步骤

①细胞培养过夜或更长，使其密度达到50 - 60%汇合度。

②吸掉培养液，37℃预热的1×PBS(pH7.4)清洗细胞2次。

③使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30 min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

④室温条件下，用PBS清洗细胞2-3次，每次10min。

⑤(可选)：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5 min，从而增加其通透性。

⑥室温条件下，用PBS清洗细胞2-3次，每次10 min。

⑦取足够量新鲜配好的iFluorTM 633标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞，如：100 µL/孔(96孔板)，室温避光染色20-90 min。

⑧用PBS清洗细胞3次，每次5 min。

⑨(可选)：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100 µL/孔(96孔板)，室温3-5 min。用PBS清洗细胞2次，每次5 min。

⑩于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择iFluorTM 633激发/发射滤片(Ex/Em=640/654 nm)或DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454 nm)。

注意事项

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4、鬼笔环肽具有毒性，需小心操作(对人的半数致死剂量LD50约2 mg/kg)。