JC-10线粒体膜电位检测试剂盒

产品描述

JC-10是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-10是一种新型的用来监测线粒体膜电位变化的荧光探针，是JC-1的优越替代物。与JC-1相比，具有以下几个重要优势：①溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明显降低;②使用更方便——简化步骤将手动操作时间最小化;③荧光信号更高——改良的信号与背景荧光的信噪比;④结果更稳定——优化探针以保证更连续性和稳定性结果。

JC-10是一种替换JC-1，用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。JC-10以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-10聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=540nm, Em=590nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光(Ex=490 nm, Em=525 nm)。本试剂盒提供CCCP用作线粒体膜电位丧失的阳性对照。对于六孔板样品，本试剂盒可检测100个样品。

产品信息

表1.产品信息

表2.组成信息(以100T为例)

产品优势

JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

使用说明

1、JC-10染色工作液制备(以100T为例)

对于六孔板，本试剂盒可检测100个样品。每孔所需JC-10染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-10染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-10染色工作液。取适量JC-10(200×)，按照每50μL JC-10(200×)加入8mL超纯水的比例稀释JC-10。剧烈震荡充分溶解并混匀JC-10。然后再加入2mL JC-10染色缓冲液(5×)，混匀后即为JC-10染色工作液。

【注意】：必须先把JC-10(200×)用超纯水(试剂盒提供)充分溶解混匀后，才可加入JC-10染色缓冲液(5×)。不可先配制JC-10染色缓冲液(1×)再加入JC-10(200×)，这样JC-10会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。

2、阳性对照的设置

CCCP(10mM)推荐按1∶1000的比例加入到细胞培养液中，稀释至10μM，处理细胞20min。随后按照下述方法装载JC-10，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常10uM CCCP处理20 min后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-10染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。

3、对于悬浮细胞

①取10～60万细胞，重悬于0.5mL细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。

②加入0.5mL JC-10染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育20min。

③孵育期间，按照每1mL JC-10染色缓冲液(5×)加入4mL蒸馏水的比例，配制适量的JC-10染色缓冲液(1×)，并放置于冰浴。

④37℃孵育结束后，600×g4℃离心3～4min沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。

⑤用JC-10染色缓冲液(1×)洗涤2次：加入1mL JC-10染色缓冲液(1×)重悬细胞，600×g4℃离心3～4min沉淀细胞，弃上清。再加入1mL JC-10染色缓冲液(1×)重悬细胞，600×g4℃离心3～4min沉淀细胞，弃上清。

⑥再用适量JC-1染色缓冲液(1×)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。

4、对于贴壁细胞

【注意】：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的方法进行检测。

①对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据具体实验如有必要可用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1mL细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。

②加入1mL JC-10染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育20min。

③孵育期间，按照每1mL JC-10染色缓冲液(5×)加入4mL蒸馏水的比例，配制适量的JC-10染色缓冲液(1×)，并放置于冰浴。

④37℃孵育结束后，吸除上清，用JC-10染色缓冲液(1×)洗涤2次。

⑤加入2mL细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。

⑥荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。

注意事项

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4、JC-10(200×)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

5、装载完JC-10后用JC-10染色缓冲液(1×)洗涤时，使JC-10染色缓冲液(1×)保持4℃左右，此时洗涤效果较好。

6、JC-10探针装载完并洗涤后尽量在30min内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。

7、请勿把JC-10染色缓冲液(5×)全部配制成JC-10染色缓冲液(1×)，本试剂盒使用过程中需直接使用JC-10染色缓冲液(5×)。

8、如果发现JC-10染色缓冲液(5×)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，可在37℃加热促进溶解。

9、CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。