原代大鼠耳软骨细胞（免疫荧光鉴定报告）

背景简介

弹性软骨仅存在高等动物外耳廓、听道、会咽等处。与其它软骨相比，间质中含有大量交织成网的弹性纤维，成网状在软骨内排列，同时含有少量胶原纤维。目前，弹性软骨大多被用于修复人类残缺及畸形耳廓及其它美容修复。

细胞产品信息

原代大鼠耳软骨细胞培养操作步骤

原代大鼠耳软骨细胞传代操作方法

到货方式：复苏细胞/T25瓶运输

收货处理

1.收到原代大鼠耳软骨细胞后，请检查发货培养瓶的状况，是否有破损、漏液、浑浊等现象。如果有，请立即和我们联系;如果没有，请您用75%酒精消毒细胞瓶外壁，再将其置于37度培养箱静置4h。细胞密度小于80%时，请换液并让细胞瓶处于透气状态(培养基不能回收使用)。

2.静置后观察细胞状态，在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断原代大鼠耳软骨细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20X物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。拍照反馈给我们。

原代大鼠耳软骨细胞传代操作步骤

传代密度：原代大鼠耳软骨细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察原代大鼠耳软骨细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

原代大鼠耳软骨细胞培养注意事项

1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养原代大鼠耳软骨细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

2.因运输问题，部分原代大鼠耳软骨细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

3申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，建议客户在细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5. 细胞在不同实验室培养由于所使用培养基及血清品牌、个人操作习惯、培养瓶品牌等诸多培养条件不尽相同，导致细胞培养形态、生长速度、贴壁情况均可能有所差异，对于此类细胞适应环境生长的行为，不予过度解释或免费售后。

原代大鼠耳软骨细胞复苏操作步骤

到货方式：冻存细胞/1ml冻存管运输

收货处理

1.干冰运输的原代大鼠耳软骨细胞到货，请检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞，如若不能复苏请立即转入液氮冻存。

原代大鼠耳软骨细胞复苏方法

将含有1 mL原代大鼠耳软骨细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀

在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。

然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

原代大鼠耳软骨细胞冻存操作方法

冻存液配方：无血清冻存液，液氮储存

冻存密度

如果是有要求每管要冻多少细胞，那就用1ml完培重悬后，取部分按平时方法计数，剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可。

如果没要求，那就按平时，一个皿冻一管。

原代大鼠耳软骨细胞冻存操作步骤

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

1.收集原代大鼠耳软骨细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。

2.根据细胞株数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x10^6~1x10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

原代大鼠耳软骨细胞冻存注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案,