DiOC6(3) 膜电位荧光探针

产品简介

DiOC6(3)，英文全名3，3，-Dihexyloxacarbocyanine lodide，CAS NO，53213-82-4，是一种具细胞膜渗透性、发绿色荧光的亲脂性染料。作为一种膜探针，DiOC6(3)在高浓度下能对活细胞和固定细胞的内质网(高尔基体)染色，也能对衰泡膜和线粒体染色。而在更低浓度下，偏向选择性染色线粒体。DiOC6(3)能用来标记活纽胞，然而，由于光动力学毒性会快速破损，经其标记的细胞仅能短时间暴露在光下。神经元和酶母细胞中，Di0C6(3)曾用来研究内质网(ER)结构的相互作用和动力学;当染料浓度提高或在某些呼吸缺陷的酶母菌株内，DiOC6(3)能特异性染酵母核膜，而且县足够灵敏性来揭式核膜(已知称为karmelae)的变化。

产品信息

表1.组成信息

使用说明

1、染色液制备

(1)储存液制备:用DMSO或无水乙醇配置浓度1-5mM的储存液。例如，取10mg DiOC6(3)(Mw:572.52 g/mol)溶于3.49mL无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。

【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，调整到1-5M的工作浓度。

【注意】:工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2、悬浮细胞染色

(1)加入适当体积的染色工作液重是细胞，使其密度为1×106/mL,

(2)37℃孵育细胞2-20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

(3)孵育结束，按1000-1500rpm离心5min:

(4)去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

(5)再重复(3)，(4)步骤两次。

3.、贴壁细胞染色

(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

(2)从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

(3)在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

(4)37℃孵育细胞2-20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2-3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5-10min，然后吸走培养基。

4、显微镜检测

(1)DiD，DiO，DiI，DiR滤光器的选择参见下表:

5、流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

注意事项

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。