大鼠少突胶质前体细胞

1．将恒温水浴锅中的水预热到 37℃。

2．准备一支15ml离心管，加入5ml含10%FBS的完全培养基，放入 37℃水浴锅中预热。

3．戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率。

4．将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min。

5．准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 完全培养基。

6．离心完成后弃去上清，用 1ml 完全培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入 CO2培养箱中培养静置。

1．吸出原培养液。

2．加入 2-3ml 不含钙、镁离子的 PBS(37℃预热)润洗细胞一次，吸出 PBS 丢弃。

3．加入 1ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，并轻轻晃动培养瓶至消化液浸润所有细胞，放入 37℃培养箱消化细胞 2-3min。

4．倒置显微镜下观察，待细胞明显变圆有间隙后（全程请不要拍打培养瓶），再加入 3-5ml含 10% 血清的培养基终止消化。

5．用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，200g，3-5min 离心去除残留胰酶。

6．去掉上清，结合需求进行后续相关实验操作。

1．收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，200g 条件下离心 4 min，弃去上清液，用 PBS 清洗一遍，弃尽 PBS，进行细胞计数。

2．根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度1-1.5×106/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存 1mL 细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3．将冻存管放入-80℃冰箱，24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

1．收到常温细胞后，首先观察细胞瓶是否完好，有无漏液现象，若有上述问题发生请及时和我们联系。

2．显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，属正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将细胞培养瓶置于37℃培养箱静置2-4 h，以便稳定细胞状态。

3．仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、生长特性、所用培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担（客户需咨询其培养条件是否与我们一致）。

4．静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）。

5．稳定细胞状态后建议直接进行实验或消化传代，不需要进行换液后再传代（操作不当易导致细胞状态差）。

6．大鼠少突胶质前体细胞体外培养周期有限，建议使用IMMOCELL配套的专用培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

7．建议进行细胞培养后，前3天定期拍照，记录细胞状态，若观察到异常或对细胞有疑问，请及时与代理商或我们联系。对于细胞培养操作及培养注意事项有疑问的，可与我们的技术支持交流。

1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操 作。

3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完 全培养基来培养细胞。

1.收到细胞后，首先观察 并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是 否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天 以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记 录细胞生长状态。

3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常 现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪 回访直至问题解决。

4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比 例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承 担。